Choque. 21 de octubre de 2025. doi: 10.1097/SHK.0000000000002689. En línea antes de imprimir.
ANTECEDENTES: La lesión pulmonar aguda (LPA) causada por sepsis es una complicación grave de la sepsis y una causa importante de muerte, y existe una falta de tratamiento farmacológico eficaz. La expresión del receptor II del factor de crecimiento transformante beta (TGFBR2) está relacionada con la sepsis y la lesión pulmonar aguda. Por lo tanto, este estudio tiene como objetivo aclarar el mecanismo de TGFBR2 en la ALI inducida por sepsis.
MÉTODOS: El estudio estimuló células endoteliales microvasculares pulmonares humanas (HPMEC) utilizando lipopolisacáridos (LPS) para establecer un modelo ALI in vitro. Los niveles de proteína y ARNm se detectaron mediante transferencia Western y reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR), respectivamente. La viabilidad y proliferación celular se evaluaron utilizando el kit de recuento celular-8 (CCK8) y los ensayos de 5-etinil-2′-desoxiuridina (EdU), respectivamente. Se realizó citometría de flujo para analizar la apoptosis celular. Se realizó un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) para detectar los niveles de interleucina (IL)-6, IL-1β y factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α). Los niveles de especies reactivas de oxígeno (ROS) y malondialdehído (MDA) se examinaron utilizando los kits de detección correspondientes. Se utilizó análisis bioinformático para predecir las modificaciones de metilación de N6-metiladenosina (m6A) y la interacción entre TGFBR2 y metiltransferasa 14 (METTL14)/proteasa 7 específica de ubiquitina (USP7). Se utilizaron inmunoprecipitación de ARN (RIP), inmunoprecipitación de ARN metilado (MeRIP) y ensayo de gen indicador de luciferasa dual para identificar la asociación de TGFBR2 con METTL14 y la proteína de unión a ARNm 2 del factor de crecimiento similar a la insulina 2 (IGF2BP2). Además, se realizaron ensayos de co-inmunoprecipitación (Co-IP) y desubiquitinación sobre la relación entre USP7 y TGFBR2 mediante la base de datos ubibrowser. Finalmente, se estableció un modelo murino de sepsis polimicrobiana para analizar los efectos de TGFBR2 sobre la lesión pulmonar in vivo.
RESULTADOS: Los niveles de TGFBR2 se expresaron altamente en el suero de pacientes con sepsis-ALI y HPMEC inducidas por LPS. La caída de TGFBR2 remitió la inhibición de la viabilidad y la proliferación inducida por LPS, así como los efectos promotores inducidos por LPS sobre la apoptosis, la inflamación y el estrés oxidativo de HPMEC. METTL14 e IGF2BP2 estabilizaron la expresión del ARNm de TGFBR2 mediante la modificación de la metilación de m6A. Además, el silenciamiento de METTL14 protegió a las HPMEC de la lesión inducida por LPS al disminuir la expresión de TGFBR2. USP7 podría estabilizar la expresión de TGFBR2 mediante desubiquitinación, y si-USP7 mejoró el daño de HPMEC inducido por LPS mediante la inhibición de la expresión de TGFBR2. La caída de TGFBR2 alivió la ALI inducida por sepsis in vivo.
CONCLUSIÓN: TGFBR2 facilita la inflamación y el estrés oxidativo en la ALI inducida por sepsis a través de la modificación de m6A mediada por METTL14/IGF2BP2 o la desubiquitinación regulada por USP7. Estos hallazgos proporcionan un nuevo objetivo terapéutico potencial para el tratamiento de la ALI inducida por sepsis.
PubMed:41166067 | DOI:10.1097/SHK.0000000000002689